Histologia 1 . TÉCNICAS HISTOLÓGICAS Y MICOSCOPICAS

Histología

Concepto de histología

Es la rama de la anatomía que estudia los tejidos de animales y plantas.

Se emplea como sinónimo de anatomía microscópica, ya que su materia no sólo incluye la estructura microscópica de los tejidos sino también la de la célula, órganos y sistemas.

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS Y MICOSCOPICAS

Bibliografía recomendada:

Texto  de Atlas de Histología  por Leslie P. Garther. James L. Hiatt

Histología por Finn Geneser

Histología. Texto y Atlas Color con Biología Celular y Molecular por

Toda practica tiene un fin o misión.. La idea de esta práctica es que el alumno salga con un conocimiento básico el manejo, cuidado del microscopio.

Describir las características microscópicas ultraestructurales. Y las técnicas para el procesamiento, observación y diagnostico histológico de las células y tejidos básicos

Para qué sirve el microscopio a los futuros médicos o estudiantes de medicina?

Esto es lo que debe de tener un laboratorio de histología: un microscopio, los fijadores, alcoholes, el material, _______ de mayo…

Desde el punto de vista morfológico los seres vivos están constituidos por células, sustancia intercelular, tejidos orgánicos y aparatos.

Las técnicas histológicas tienen por objetivo preparar estas sustancias y tejidos para su visualización y estudio, bajo un microscopio, mediante métodos mecánicos, térmicos, químicos y fisiológicos

Los estados en los cuales los tejidos pueden ser observados:

Para estudiar una muestra o tejido, debemos tener una parte donde tomar esa muestra que puede ser una persona, un animal o un objeto. 

Entonces los Métodos de estudio  (exámenes)  que vamos a realizar o utilizar para la obtención de esa muestra son:

1.       Exámenes  inmediatos o in vivo:

a)      Observación de células en el organismo vivo: ejemplo espermatograma

 Profesor: en personas o animales vivas, que permitirán la observación de las células vivas, que se mantienen vivas después de ser quitadas del organismo ejemplo el espermatograma, porque estudiamos la cantidad, la movilidad de esa célula. El espermatozoide es la célula sexual masculina y hay que estudiarla viva.

b)      Observación de células que se mantienen vivas luego de ser quitadas del organismo

2.       Exámenes mediatos o post-morten: que es el caso de las autopsias, requiere la muerte celular, y se debe seguir una serie de pasos que son las técnicas histológicas. Aquí es donde se van a usar estas técnicas histológicas.

Las técnicas en vivo se llaman biopsias, y como regla mundial toda aquella estructura que se retira del cuerpo humano debe realizársele estudios de biopsia , para hacer un despistaje de cáncer.

En células vivas (biopsia)  buscamos  de enfermedad, en células muertas (autopsia) causa de muerte.

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Las técnicas histológicas son los diferentes procedimientos que se usan para mantener, en lo posible el aspecto de las estructuras histológicas del organismo vivo, transformándolas en delgados cortes coloreados que pueden posteriormente ser observados en el microscopio.

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Cuáles son los pasos a ser para la realización de la técnicas histológicas para la obtención de una lámina

Toma de muestra

 Montaje

Extensión

Corte

Aclaramiento

Fijación

Deshidratación

Coloración

CUÁLES SON LOS PASOS POR ORDEN A SER PARA LA REALIZACIÓN DE LA TÉCNICAS HISTOLÓGICAS PARA LA OBTENCIÓN DE UNA LÁMINA

Por orden seria:

1.       Toma de muestra

2.       Fijación

3.       Deshidratación

4.       Aclaramiento

5.       Infiltración e inclusión

6.       Sección o Corte

7.       Coloración

8.       Montaje

1.       TOMA DE MUESTRA:

Existen diversos procedimientos que permiten obtener muestras de tejidos y órganos para conseguir preparaciones histológicas de buena calidad. Estos son:

a) Mediante la biopsia: consiste en la toma de un fragmento de tejido u órgano de un ser vivo. Realiza a través de una operación quirúrgica hecha exprofesamente o durante la intervención quirúrgica efectuada en pacientes y corroborar así un diagnóstico de una determinada lesión. La biopsia puede ser:

Incisional

Excisional

Por sacabocados

Por punción y absorción

Por raspado

Por trepanación 

b) mediante la necropsia, las muestras se obtienen de seres muertos: En este caso es recomendable que los tejidos y órganos se obtengan inmediatamente después de producida la muerte. 

 2.  LA FIJACIÓN

Es un procedimiento cuya finalidad, al aplicarlo es Detener la vida de las células e impedir las modificaciones post morten que pueda sufrir la célula (procesos autolíticos), manteniendo la estructura morfológica de células y tejidos sin que ocurran cambios notables en ellos.

Por el profesor En la fijación es el procedimiento donde se  introduce el tejido en sustancias que  retardan su alteraciones   y conservan su configuración normal. No se acuerdan que yo les dije que es como un rayo paralizante, porque paraliza el proceso descomposición o putrefacción de la muestra sin alterar su estructura.

El fijador de mayor uso o el que se usa aquí: es el formaldehido al 10 %.

3.       DESIDRATACION:

Por el profesor: Consiste en introducir el tejido fijado en frasco de alcohol absoluto a concentraciones ascendentes y en tiempos determinados.  Para eliminar el agua.

Cinco o seis frasco con diferente concentración de alcohol

Deshidratación. Significa extraer o remover el agua de los tejidos fijados.

4.       ACLARAMIENTO:

Este paso sustituye el alcohol por Xilol (vuelve trasparente el tejido), es un líquido transparente, muy parecido (miscible) a la parafina. Hay un xilol    de 45´,  100°

5.       INFILTRACIÓN e INCLUSION:

Es la formación del bloque de parafina, mediante la inclusión del tejido en esta,  recibiendo el nombre de taco.

Dentro de ese taco esta la muestra.

Las sustancias de inclusión tienen la propiedad de incorporarse e infiltrarse al interior de las células y tejidos con la finalidad de servirles de soporte. Así los tejidos y la sustancia de inclusión forman un bloque homogéneo en dureza y consistencia, a pesar que sus componentes tuvieron  originalmente distinta dureza.

La penetración de la parafina al interior de los tejidos se efectúa cuando ésta se encuentre en estado líquido.

6.       SECCIÓN O CORTE

Consiste  en cortar el tejido en secciones suficientemente delgadas que permitan el paso de la luz, este corte se realiza con un micrótomo.

Los micrótomos se clasifican de acuerdo a la manera como se desplaza el bloque que contiene el tejido incluido; así, existen:

a) Micrótomo de rotación tipo Minot.

b) Micrótomo de deslizamiento. 

Los micrótomos tipo Minot son los de uso más frecuente en cualquier laboratorio donde de realiza técnica histológica, especialmente cuando los tejidos están incluidos en parafina. Los micrótomos de deslizamiento, en cambio, se emplean cuando los tejidos están incluidos en celoidina o cuando la inclusión en parafina contiene porciones voluminosas de tejidos y órganos.

Los micrótomos tipo Minot permiten obtener secciones delgadas, del orden de 4 a 7m de espesor. Producen cortes seriados, 

Para eliminar el pliegue o arruga del tejido, el corte es llevado a un recipiente para recibir un baño de flotación de 40 ° C

7.       COLORACIÓN O TINCIÓN Y MONTAJE.

Los  cortes se ponen sobre el portaobjeto y luego se tiñen mediante coloraciones hidrosolubles, que permiten diferenciar los diferentes componentes celulares.

Como hay elementos de esas células que son afines a esas coloraciones, y no se van a ver si no se coloca la coloración. Si la estructura es acida se trabaja con colorantes ácidos, y si su estructura es alcalina se tiene que trabajar con colorantes alcalinos.

Para adherir el corte a la lámina  se colócala una lámina  porta-objetos  y  se lleva a la estufa por 15 a 20 minutos a  80 °C.

El procedimiento de coloración o tinción consiste en que una estructura celular o tisular adquiere específicamente un color bajo la acción de una sustancia colorante. Se considera que una estructura se ha coloreado o teñido cuando al ser lavada con el líquido que disuelve al colorante, no se decolora.

La coloración proporciona diferencias evidentes entre las estructuras y al observar los cortes será fácil reconocerlas.

Para hacer la tinción: 

                Al corte hay que extraer la parafina después de realizado el corte, se  hidratar y luego colorear, pasa con agua caliente, eosina y el xilol. Queda la muestra con todas las características innatas de cómo fue extraída en vivo el tejido. Se colócala lamina, se coloca el martex,  que es como una pega, un barniz. Se  le coloca  un cubre objeto y el  tejido está listo para observarlo en el microscopio.

(Xilol =decreciente 5 frascos por 5 min; agua ; hematoxilina; agua 70; eosina; alcohol creciente; xilol y montar con cubre objeto)

Una de las coloraciones más usadas en las técnicas histológicas es la hematoxilina-eosina. La hematoxilina es un colorante básico que tiñe de color azuloso a los componentes ácidos de la célula (acido-azul). La eosina es un colorante acido que tiñe de color rosado a los componentes básicos de la célula. Es el más usado, o el 90% de las láminas están coloreadas con hematoxilina-eosina.

Consiste en la tinción de: 

a) los núcleos mediante una hematoxilina, previamente oxidada y transformada en hemateina a la que se le añade una sustancia mordiente para formar una laca (para tal fin se usan sales metálicas de aluminio, plomo o fierro). Los núcleos se colorean de azul, azul morado, violeta, pardo oscuro o negro, dependiendo de los agentes oxidantes y mordientes que se utilizaron. 

b) el citoplasma y material extracelular utilizando la eosina que les confiere diversos grados de color rosado.

OJO Nota; en el examen práctico se le da una lámina y en 5 minutos debe decir cual es la lámina riñón, coloración que se usó: hematoxilina-eosina y cinco razones o diagnósticos por la que usted cree que es un riñón: rojo tengo un epitelio plano estratificado, describir porque es un epitelio plano estratificado.

OTRAS TECNICAS DE TINCION

 Además de las técnicas histológicas hay otro tipo de técnicas que bajos a estudiar como conocimiento general

1.       Tricrómica de masson:                  color azul oscuro: núcleo

Rojo: músculos, queratina, citoplasma

Azul claro: mucinoso, colágena

2.       Colorante de orceína                     pardo: fibras elásticas

para fibras elásticas:

3.       Colorante Weigert                          azul: fibras elásticas

Para fibras elásticas

4.       Tinciones argénticas                      negro: fibras reticulares

5.       Hematoxilina férrica                      negro: estriaciones de músculos, núcleo, eritrocitos

6.       Ácido peryodico de Schiff            magenta: moléculas ricas en glucógeno y carbohidratos

7.       Colorante de Wright y Giemsa                  se utiliza para tinciones diferenciales de células

Hemáticas

Rosa: eritrocitos, gránulos de eosinófilos

Púrpura: núcleos de leucocitos, gránulos basófilos

Azul: citoplasma de monocitos y linfocitos.

Profesor: tenemos colorantes especiales para diferentes tipos de tejido. Por ejemplo para ver glucosa, proteína y para ver grasase tiene un colorante especial. Por ejemplo yo quiero ver un tejido adiposo no lo puedo teñir con hematoxilina-eosina porque no lo voy a ver. Cuando quiero observar glucosa que es azúcar, carbohidrato no lo puedo teñir con hematoxilina y eosina porque no se va a observar, 

El colorante tricomina de Masson es de color azul oscuro y se utiliza para ver núcleo, musculo, queratina. La queratina es una proteína que se va a conseguir en la piel y es la que da la dureza de la piel. Azul claro tejido colágeno, que es tejido conectivo. 

El colorante orceina para fibras elásticas. Cuando veamos tejido conectivo vamos a ver un poco de fibras elásticas colágeno y fibras reticulares. Estas fibras son lo que componen tejidos que se van a ver en la lámina  es con este tipo de colorante y es llamada bolo de edema y es tejido tomado del pene.

El colorante de argentica.  Se ve negro Para ver fibras reticulares

Hematoxilina férrica: de negro estriaciones de músculo, núcleo y eritrocitos

Ácido peryodico o colorante de Schiff con color magenta para carbohidratos y glucógeno

El colorante Wright y Giemsa: para tinciones diferenciales de células hemáticas. Donde tenemos los eritrocitos o glóbulos rojos. Hay tres series a nivel de la sangre que son la células rojas , las células blancas y las células plaquetarias. La serie roja que es la hemoglobina, eritrocitos, lo que es rojo. La serie blanca que es los glóbulos blancos con todos neutrófilo, eusinofilos, basófilos. Y las plaquetas son plaquetas.

Esto es un epitelio y ellos se van a clasificar por el numero capas de células, simple (por una sola capa de células) o estratificado (formado por más de una capa)

El epitelio descansa la región basal.

Se encuentra El tejido conectivo, que está formado por tipos de tejido especializado, cartílago, hueso, serie hematopoyética (glóbulos rojos, glóbulos blancos, plaquetas),

De afuera hacia dentro se va a ver tejido epitelial, luego tejido conectivo todos los tejidos especializado.

Vamos a caracterizar ciertos órganos por el tejido epitelial, ciertos órganos por el cartílago

Por ejemplo vemos una lámina con un  cartílago, donde tenemos este tipo de tejido: lo conseguimos en la oreja, nariz, entre costilla y esternón, entre las articulaciones, pero la tráquea, la epiglotis, yo veo cartílago esto tiene que ser tráquea o epiglotis. La diferencia histológica es que la epiglotis  es un elástico y la tráquea un cartílago hialino.

Encontramos, eusinofilos, basófilos

Ver imágenes de los corte

El ganglio raquídeo como un huevo al revés

El hígado,

MICROSCOPIO

El microscopio es un dispositivo encargado de hacer visible objetos muy pequeños que no pueden ser observados por el ojo humano directamente.

Es el instrumento más importante en la histología, debido a l tamaño de las estructuras analizadas.

Se clasifica según el tipo de fuente luminosa que utilice.

La calidad de la imagen al microscopio no solo depende de la capacidad de la lente para amplificar, sino de su resolución, que es la capacidad de la lente para mostrar que dos objetos distintos están separados por una distancia. (pregunta de examen que es la resolución)

Profesor: de la nitidez que es cuando tu estas enfocando

Tipos de Microscopios

·         Microscopio Óptico

-          Óptico simple: formado por un lente, es monocular

-          Óptico compuesto: formado por dos lentes, es bio-ocular

·         Microscopio Electrónico

-          Electrónico de transmisión:

-          Electrónico de barrido

Tipos de microscopios:

-          Ultramicroscopio

-          Microscopio de contraste de fase

-          Microscopio de interferencia

-          Microscopio con focal

-          Microscopio de polarización

-          Microscopio de fuerza atómica

MICROSCOPIO OPTICO:

Consiste en una fuente luminosa, un condensador que enfoca los rayos de luz sobre la muestra, una platina en la cual se coloca la muestra, un objeto y un ocular

Componentes del Microscopio:

Sistema Óptico

Sistema de Iluminación

Sistema mecánico

El Profesor: En algunos libros van a conseguir que el microscopio óptico se va a dividir en una parte en una parte óptica y otra mecánica.

En la parte Óptica se encuentra todo lo que es tipo de lentes y la mecánica con la parte que sostiene esos lentes.

Los libros que lo dividen así incluyen la parte de iluminación en la parte óptica.

En la parte o sistema  óptica y de iluminación tenemos:

-          Ocular: es un cilindro hueco metálico, provisto de una lente o un sistema de lentes convergentes, cuya finalidad es aumentar la imagen real e invertida enviada por el objetivo.  (donde ponemos los ojos). Esto es que lo derecho es izquierdo, lo izquierdo es derecho, que lo anterior es posterior, y lo posterior es anterior. Pregunta de examen. La imagen que da el microscopio es una imagen real invertida, una imagen real normal. 

Se adapta porque da el aumento, los que usamos lentes no es necesario usar lentes porque este es un lente, un ocular para cada ojo.

-          Objetivo: (son tres). Lente situada cerca de la preparación, amplían la imagen de esta 4X, 10X, 40X, 100X. se debe comenzar a observar con el objetivo de menor óptica. Se va de menor a mayor óptica. Cuando se usa el de mayor óptica hay que tener mucho cuidado porque esta pegadito a la lámina y cualquier movimiento parte la lámina. 

-          Condensador: se encarga de concentrar la ( el haz de luz) luz sobre la preparación. (Se cierra y no deja pasar y no se ve.)

-          Fuente de luz

En el Sistema Mecánico tenemos:

-          Cabezal

-          Brazo

-          Columna

-          Platina

-          Base

-          Revolver

-          Tornillo macrométrico: da movimientos grandes para que la platina suba o baje

-          Tornillo micrométrico: da movimientos lentos

MICROSCOPIO ELETRONICO

·         Microscopio electrónico de transmisión:

Usa un haz de luz de electrones, para producir la imagen. Esto permite obtener una mayor ampliación y resolución. La imagen puede plasmarse en una película y producir micrografías en blanco y negro.  Que es la s micrografías que vemos en los libros.

·         Microscopio electrónico de barrido

Proporciona una imagen tridimensional del espécimen. El haz de luz de electrones no atraviesa el objeto, por lo que no es necesario utilizar cortes ultra finos. La imagen obtenida es observada en una pantalla de tv.